5A氨基酸取代Y93H。另外，在基因型1a复制子中出现一种Q30E取代。在基因型1a和1b二者中Y93H位点-指向突变发生，以及在基因型1a中Q30E 取代，赋予对ledipasvir高水平减低敏感性(在EC50倍数变化大于1000-倍)。
在对多种基因型包括1b，2a，2b，3a，4a，5a，和6a细胞培养物中曾选择出对sofosbuvir有减低敏感性的HCV复制子。在被检查的所有复制子基因型对sofosbuvir减低敏感性是伴随主要NS5B取代S282T。在8种基因型复制子S282T 取代位点-指向突变发生赋予对sofosbuvir敏感性减低2-至18-倍。
在临床试验中
在3期试验中接受HARVONI受试者的合并分析中，37例受试者(29例有基因型1a和8例有基因型1b)由于病毒学失败(35例有病毒学复发，2例由于记录不遵守有对-治疗突破)对耐药性分析合格。基线后NS5A和NS5B深度测序数据(分析截止1%)是可得到受试者的病毒分别为37/37和36/37。
在29例基因型1a病毒学失败受试者中，55%(16/29)受试者在失败时有病毒出现NS5A耐药关联取代K24R，M28T/V，Q30R/H/K/L，L31M，或Y93H/N。这些5/16例受试者还有在耐药性-关联氨基酸位置基线NS5A多态性。在失败时检测到最常见取代为Q30R，Y93H或N，和L31M。
在8例基因型1b病毒学失败受试者中，88%(7/8)在失败时有病毒出现NS5A耐药关联取代L31V/M/I或Y93H。这些3/7受试者还有在耐药性-关联位置基线NS5A多态性。在失败时最常见被检测到的取代是Y93H。
在失败时，38%(14/37) 的病毒学失败受试者在耐药-相关位置有2个或更多NS5A取代。
在表型分析中，基线后分离株来自在失败时受试者包含显示对ledipasvir敏感性减低20-至>243-倍的NS5A耐药关联取代。
治疗-出现NS5B取代L159(n=1)和V321(n=2)伴随以前在3期试验sofosbuvir失败检测到的取代。此外，NS5B在高度保守位置的取代D61G(n=3)，A112T(n=2)，E237G(n=2)，和S473T(n=1)是在感染有HCV GT1a治疗失败受试者通过下一代测序曾低频检测到。在一项肝移植前试验在有HCV GT1a感染受试者以前描述过D61G取代。目前对这些取代的临床意义不清楚。
从3期试验的任何失败分离株没有检测到在NS5B中sofosbuvir-关联耐药性取代S282T。在一项2期试验在1例用HARVONI治疗8周后的受试者在失败时检测到NS5B 取代S282T，L320V/I，和V321I与NS5A取代L31M，Y93H，和Q30L组合。
交叉耐药性
Ledipasvir对sofosbuvir在NS5B中耐药性-关联取代S282T是有完全活性而在NS5A所有ledipasvir耐药关联取代对sofosbuvir是完全敏感。Sofosbuvir和ledipasvir两者是对取代伴随耐药性对其他类别有不同作用机制的直接-作用抗病毒药是完全有活性，例如NS5B非-核苷抑制剂和NS3蛋白酶抑制剂。NS5A取代赋予耐药性对ledipasvir可能减低其他NS5A抑制剂的抗病毒活性。尚未确定以前曾用其他包括一种NS5A抑制剂方案治疗失败患者中ledipasvir/sofosbuvir的疗效。
耐药关联取代的持久性
对耐药性-关联取代的持久性没有可得到数据。曾在有些患者中发现NS5A耐药关联取代对其他NS5A抑制剂持续共>1年。
基线HCV多态性对治疗反应的影响
进行分析探索预先存在基线NS5A多态性在耐药性-关联位置和复发率间关联。在3期试验的合并分析中，通过群体或深度测序鉴定23%(370/1589)受试者的病毒在耐药性-关联位置有基线NS5A多态性(在NS5A氨基酸位置24，28，30，31，58，92，或93从参比的任何变化)。
在研究ION-1和ION-3在未治疗过受试者其病毒在耐药性-关联位置处有基线NS5A多态性，用HARVONI8周治疗后复发率为6%(3/48)和12周后为1%(1/113)。在耐药性-关联位置无基线NS5A多态性受试者用HARVONI治疗8周后复发率为5%(8/167)和12周后1%(3/306)。
在经历治疗受试者其病毒在耐药性-关联位置有基线NS5A多态性，用HARVONI治疗12周后复发率为22%(5/23)和24周后为0%(0/19)。
在基因型1a有复发受试者中观察到特异性基线NS5A耐药性-关联多态性为M28T/V，Q30H，Q30R，L31M，H58P，Y93H，和Y93N，和L28M，A92T，和在基因型1b 为Y93H。在耐药性-关联位置有多个NS5A多态性受试者似乎有较高复发率。
在所有24例受试者(N=20有L159F+C316N；N=1有L159F;和N=3 有N142T)有基线多态性伴随对NS5B核苷抑制剂耐药性实现持续病毒学反应(SVR)。在3期试验通过群体或深度测序任何受试者基线NS5B序列未检测到Sofosbuvir耐药性-关联取代S282T。
13 非临床毒理学
13.1 癌发生，突变发生，生育力受损
癌发生和突变发生
Ledipasvir：在体外或体内一组试验，包括细菌致突变型，用人外周学淋巴细胞染色体畸变，和体内大鼠微核试验，Ledipasvir无遗传毒性。
在小鼠和大鼠正在进行ledipasvir的致癌性研究。
Sofosbuvir：在体外或体内一组试验，包括细菌致突变型，用人外周学淋巴细胞染色体畸变，和体内大鼠微核试验，Sofosbuvir没有遗传毒性。
在小鼠和大鼠用sofosbuvir进行2-年致癌性研究。雄性小鼠给予剂量至200 mg/kg/day和雌性600 mg/kg/day，而雄性和雌性大鼠给予剂量至750 mg/kg/day。在小鼠和大鼠在最高测试剂量观察到药物-相关肿瘤发生率无增加，导致对主要循环代谢物GS-331007AUC暴露约人在推荐临床剂量时暴露在雄性和雌性分别4-和18-倍(小鼠中)和8-和10-倍(大鼠中)。
生育力受损
Ledipasvir：Ledipasvir对交配和生育力无不良效应。在雌性大鼠中，在母体暴露人在推荐临床剂量时暴露约3-倍时黄体和植入部位均数略微减低。在最高剂量水平无效应，在雄性和雌性中对ledipasvirAUC暴露约人在推荐临床剂量时暴露分别5-和2-倍。
Sofosbuvir：当在大鼠评价时Sofosbuvir对胚胎-胎儿活力或对生育力无影响。在最高测试剂量时，对主要循环代谢物GS-331007AUC暴露为人在推荐临床剂量时暴露的约5-倍。
13.2 动物毒理学和/或药理学
Sofosbuvir：在大鼠GS-9851后(一种立体异构体混合物含约50% sofosbuvir)剂量2,000 mg/kg/day共5天观察到心脏退行性变和炎症。在这个剂量，对主要循环代谢物GS-331007的AUC暴露为在推荐临床剂量时人暴露较高约17-倍。在小鼠，大鼠 |
